पीसीआर (अनुसंधान) - आवेदन। पीसीआर तकनीक क्या है?

पीसीआर एक परीक्षण है जिसका उपयोग कई बीमारियों के निदान में किया गया है। पीसीआर विधि जीव में बैक्टीरिया की प्रत्यक्ष उपस्थिति और विशेष रूप से इसके डीएनए को दिखाने की अनुमति देती है। पीसीआर परीक्षण का उपयोग दूसरों के बीच किया जाता है Lyme रोग के निदान में। पीसीआर तकनीक क्या है? पीसीआर वास्तविक समय क्या है?

विषय - सूची:

1. पीसीआर (परीक्षण) - पीसीआर तकनीक क्या है?
2. पीसीआर (अनुसंधान) - पीसीआर पद्धति का अनुप्रयोग
3. पीसीआर (अनुसंधान) - लाइम रोग
4. पीसीआर (अनुसंधान) - परिणाम। क्या वे झूठे सकारात्मक हो सकते हैं?
5. पीसीआर (अनुसंधान) - परिणाम। क्या वे झूठे नकारात्मक हो सकते हैं

पीसीआर (पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन) आनुवंशिक और आणविक प्रयोगशालाओं में उपयोग की जाने वाली मूल विधि है। इसे 1983 में कारा मुलिस द्वारा विकसित किया गया था, जिन्हें इसके लिए 1993 में नोबेल पुरस्कार से सम्मानित किया गया था।

सुना है कि पीसीआर परीक्षण तकनीक क्या है। यह लिस्टेनिंग गुड चक्र से सामग्री है। युक्तियों के साथ पॉडकास्ट।

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पीसीआर (परीक्षण) - पीसीआर तकनीक क्या है?

पीसीआर परीक्षण में एक विशिष्ट डीएनए टुकड़ा के कई प्रवर्धन (आमतौर पर 30-40 चक्र) होते हैं, जो पोलीमरेज़ एंजाइम के उपयोग के साथ बोरेलिया प्रोटीन को एन्कोडिंग करते हैं।

फिर, प्रवर्धित डीएनए टुकड़े को दृश्यमान बनाने के लिए विशेष आणविक रंजक का उपयोग किया जाता है। पीसीआर, विशिष्ट डीएनए अंशों के प्रवर्धन के कारण, एक अति-संवेदनशील विधि है।

पीसीआर विधि में, डीएनए डीएनए के एक दिए गए क्षेत्र के लिए विशिष्ट प्राइमर जोड़े का उपयोग करके डीएनए टुकड़े को बढ़ाया जाता है। उदाहरण के लिए, लाइम रोग के निदान में प्रयुक्त पीसीआर में लक्ष्य क्षेत्र जीन एन्कोडिंग प्रोटीन हैं, उदा। 16S rDNA, recA, fla, p66, OspA।

जैविक सामग्री जिससे परीक्षण किया जा सकता है:

• रक्त
• एक प्रवासी एरिथेमा से त्वचा का एक खंड
• मस्तिष्कमेरु द्रव
• श्लेष द्रव या आर्टिकुलर उपास्थि से
• मूत्र

पीसीआर (अनुसंधान) - पीसीआर पद्धति का अनुप्रयोग

पीसीआर विधि का उपयोग करके लाइम बोरेलीओसिस के निदान के अलावा, अन्य सूक्ष्मजीवों या मनुष्यों के विशिष्ट डीएनए टुकड़ों का पता लगाना संभव है। इसलिए, पीसीआर विधि का उपयोग इसमें भी किया जाता है:

• वायरल संक्रमणों का निदान और निगरानी: हर्पीसर्विस (दाद वायरस, हरपीज जोस्टर, एपस्टीन-बार, साइटोमेगालोवायरस), एचआईवी, हेपेटाइटिस वायरस (एचबीवी और एचसीवी)
• बैक्टीरियल संक्रमणों का निदान और निगरानी, ​​विशेष रूप से उन जीवाणुओं को जिन्हें संस्कृतियों के माध्यम से पहचाना नहीं जा सकता है, जैसे कि तपेदिक
• निदान और नियोप्लास्टिक रोगों की निगरानी: ल्यूकेमिया, स्तन कैंसर, कोलोरेक्टल कैंसर, फेफड़े का कैंसर
• कैंसर की पहचान का निदान: स्तन और डिम्बग्रंथि के कैंसर (BRCA1 और BRCA2 जीन), कोलोरेक्टल कैंसर (APC और CHEK2 जीन)
• आनुवंशिक रोगों के निदान: हेमोक्रोमैटोसिस (एचएफई जीन), थैलेसीमिया (एचबीए 1 और एचबीए 2 जीन), सीलिएक रोग (एचएलए जीन)
• पितृत्व परीक्षण, जो बच्चे और पिता की डीएनए संगतता का पता लगाता है

यह भी पढ़ें: लाइम रोग परीक्षण - वे क्या दिखते हैं और लाइम रोग परीक्षणों की कीमत क्या है वेस्टर्न ब्लाट टेस्ट और लिम्फ रोग परीक्षण। परीक्षण की व्याख्या से टिक-जनित बीमारियां होती हैं: लाइम रोग, बेब्सियोसिस, बार्टननेलोसिस, टीबीई और अन्य।

वर्तमान में, पीसीआर विधि में कई संशोधन हैं। उदाहरण के लिए, लाइम बोरेलीओसिस के निदान में, नेस्टेड पीसीआर (नेस्टेड पीसीआर) और रियल-टाइम पीसीआर के तरीकों का मुख्य रूप से उपयोग किया जाता है। उत्तरार्द्ध एक मात्रात्मक विधि है और परीक्षण किए गए जैविक सामग्री में बोरेलिया डीएनए प्रतियों की सटीक संख्या के निर्धारण की अनुमति देता है।

पीसीआर (शोध) और लाइम रोग

सीरोलॉजिकल टेस्ट लाइम रोग के निदान का आधार हैं। हालांकि, ऐसी नैदानिक ​​स्थितियां हैं जिनके कारण ये परीक्षण गलत हो सकते हैं:

• सीरोलॉजिकल विंडो, अर्थात् संक्रमण का प्रारंभिक काल जिसमें शरीर अभी तक विशिष्ट IgM और IgG एंटीबॉडी का उत्पादन बोरेलिया स्पाइरोचेस के खिलाफ नहीं करता है
• इम्युनोडेफिशिएंसी वाले लोगों में जो पर्याप्त एंटीबॉडी का उत्पादन नहीं करते हैं
• बोरेलिया स्पाइरोकैट्स एंटीजन और उनके लिए विशिष्ट एंटीबॉडी से युक्त प्रतिरक्षा परिसरों की उपस्थिति और सीरोलॉजिकल विधियों द्वारा एंटीबॉडी का पता लगाने से रोकते हैं

यदि रोगी में लाइम रोग के लक्षण संदिग्ध हैं और सीरोलॉजिकल परीक्षण के परिणाम नकारात्मक हैं, तो पीसीआर विधि के आधार पर आणविक परीक्षण किया जा सकता है।

संक्रमण के प्रारंभिक चरण में बोरेलिया स्पाइरोकेट्स के डीएनए का पता लगाया जा सकता है, क्योंकि शरीर के तरल पदार्थों में स्पाइरोकैट्स की संख्या तब उच्चतम है।

Lyme borreliosis के निदान में, मुख्य रूप से ELISA जैसे सीरोलॉजिकल तरीकों का उपयोग किया जाता है, लेकिन कुछ नैदानिक ​​स्थितियों में पीसीआर विधि का उपयोग करके आनुवंशिक परीक्षण सहायक होते हैं।

संक्रमण से जितना लंबा समय होगा, बैक्टीरिया डीएनए का पता लगाने की संभावना उतनी ही कम होगी। इसलिए, कुछ मामलों में, पीसीआर परीक्षण किए जाने से पहले, बैक्टीरिया को विशेष मीडिया पर 1-2 सप्ताह तक उगाया जाता है और फिर परीक्षण किया जाता है।

इस दृष्टिकोण का उपयोग लाइम रोग और कटे हुए मस्तिष्कमेरु द्रव के संदेह के मामले में किया जाता है। संक्रमण के देर के चरण में, एलिसा परीक्षण करना अधिक उचित है।

पोलैंड में बोरेलिया बर्गडोर्फेरी किस्मों की घटना के संबंध में मानकीकरण की कमी के कारण पीसीआर पद्धति का उपयोग लाइम बोरेलिओसिस के नियमित निदान में नहीं किया जाना चाहिए।

हालांकि, निदान में कठिनाइयों के मामले में (विशेष रूप से रोग के प्रारंभिक चरण में), पीसीआर परीक्षण का परिणाम निदान प्रक्रिया में मदद करता है।

एक सकारात्मक परीक्षा परिणाम का मतलब है कि परीक्षण सामग्री में बोरेलिया बर्गडोरफी डीएनए और इसकी किस्मों की उपस्थिति का पता चला था, लेकिन यह स्पष्ट नहीं करता है कि शरीर में एक सक्रिय संक्रमण हो रहा है या नहीं। दूसरी ओर, एक नकारात्मक परिणाम शरीर में बैक्टीरिया की उपस्थिति को बाहर नहीं करता है।

कुछ प्रयोगशालाएं टिक में बोरेलिया डीएनए की उपस्थिति के लिए परीक्षण की पेशकश करती हैं। हालांकि, इस तरह की परीक्षा का परिणाम एक काटे हुए व्यक्ति में लाइम रोग के निदान का आधार नहीं है।

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पीसीआर - परिणाम। क्या वे झूठे सकारात्मक हो सकते हैं?

पीसीआर एक अति-संवेदनशील विधि है और एक ही समय में, संदूषण के प्रति बहुत संवेदनशील है। इसलिए, झूठी सकारात्मकता को नियंत्रित करने के लिए एक उपयुक्त आंतरिक नियंत्रण का चयन करने के लिए पीसीआर-आधारित परीक्षणों में यह बहुत महत्वपूर्ण है।

कुंजी परीक्षण के लिए सामग्री का सही संग्रह भी है और परीक्षण करने वाले निदानकर्ता के अनुभव और विश्वसनीयता का भी।

पीसीआर - परिणाम। क्या वे झूठे नकारात्मक हो सकते हैं

किसी भी प्रयोगशाला परीक्षण की तरह, पीसीआर विधि में भी, गलत नकारात्मक परिणाम दिखाई दे सकते हैं। यहां एक उचित थक्कारोधी के लिए रक्त एकत्र करना महत्वपूर्ण है, क्योंकि उनमें से कुछ, जैसे हेपरिन, पीसीआर प्रतिक्रिया को बाधित कर सकते हैं।

इसके अलावा, एंटीबायोटिक थेरेपी शुरू करने के बाद सामग्री का संग्रह पीसीआर प्रतिक्रिया की क्षमता में कमी और झूठे नकारात्मक परिणामों की अधिक संभावना हो सकती है।

यह भी याद किया जाना चाहिए कि बोरेलिया बैक्टीरिया रक्त और शरीर के तरल पदार्थों में बहुत कम समय के लिए रहते हैं, क्योंकि विशेष रिसेप्टर्स के लिए धन्यवाद वे शरीर में "मुश्किल से पहुंच" स्थानों में बहुत जल्दी प्रवेश करते हैं।

इसलिए, अन्य सूक्ष्मजीवों के निदान के विपरीत, जैविक सामग्री में बोरेलिया स्पाइरोकेट्स की संख्या छोटी है, कभी-कभी पीसीआर विधि का पता लगाने की सीमा पर भी। यह गलत नकारात्मक का कारण भी बन सकता है।

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साहित्य

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लेखक के बारे में

कैरोलीना काराबिन, एमडी, पीएचडी, आणविक जीवविज्ञानी, प्रयोगशाला निदान, कैम्ब्रिज डायग्नॉस्टिक्स पोल्स्का एक जीवविज्ञानी के साथ माइक्रोबायोलॉजी में विशेषज्ञता और प्रयोगशाला काम में 10 से अधिक वर्षों के अनुभव के साथ एक प्रयोगशाला निदानकर्ता। स्कूल ऑफ मॉलिक्यूलर मेडिसिन के स्नातक और मानव जेनेटिक्स के पोलिश सोसाइटी के एक सदस्य। हेमाटोलॉजी, ऑन्कोलॉजी और वारसॉ के मेडिकल विश्वविद्यालय के आंतरिक रोगों के विभाग में आणविक निदान की प्रयोगशाला में अनुसंधान अनुदान के प्रमुख। उन्होंने वारसॉ के मेडिकल विश्वविद्यालय के चिकित्सा संकाय में चिकित्सा जीव विज्ञान के क्षेत्र में चिकित्सा विज्ञान के डॉक्टर की उपाधि का बचाव किया। प्रयोगशाला निदान, आणविक जीव विज्ञान और पोषण के क्षेत्र में कई वैज्ञानिक और लोकप्रिय विज्ञान के लेखक काम करते हैं। दैनिक आधार पर, प्रयोगशाला निदान के क्षेत्र में एक विशेषज्ञ के रूप में, वह कैम्ब्रिज डायग्नोस्टिक्स पोलस्का में प्रमुख विभाग चलाता है और सीडी आहार क्लीनिक में आहार विशेषज्ञों की एक टीम के साथ सहयोग करता है। वह सम्मेलनों, प्रशिक्षण सत्रों और पत्रिकाओं और वेबसाइटों में विशेषज्ञों के साथ रोगों के निदान और आहार चिकित्सा पर अपने व्यावहारिक ज्ञान को साझा करता है। वह विशेष रूप से शरीर में आणविक प्रक्रियाओं पर आधुनिक जीवन शैली के प्रभाव में रुचि रखता है।